SC∕T 7237-2020 虾虹彩病毒病诊断规程(水产)
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ID： |
F8674CFFCEA741149D71D7736423C8FF |
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文件大小(MB)： |
0.66 |
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页数： |
16 |
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文件格式： |
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日期： |
2021-12-23 |
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ICS 65.020.30,B 41,←:才叫,中华人民共和国水产行业标准,SC/T 7237一2020,虾虹彩病毒病诊断规程,Code of diagnosis for infection with Decapod iridescent virus 1,2020-08-26 发布2021-01-01 实施,/巳气中华人民共和国农业农村部发布,本标准由全国水产标准化技术委员会(SAC/ TC 1 56)归口,本标准起草单位:中国水产科学研究院黄海水产研究所,本标准主要起草人邱亮、梁艳、黄债、陈蒙蒙、杨冰、万晓援、张庆利,SC/T 7237- 2020,I,SC/T 7237- 2020,虾虹彩病毒病诊断规程,范围,本标准给出了虾虹彩病毒病(infection with Decapod iridescent virus 1)诊断所需试剂和材料、器材和1,设备、临床症状，规定了采样、组织病理学检测、套式PCR 检测和综合判定的要求,本标准适用工阳忻扭叫,2 规范性引用文件,下列λ1千元,凡是不注日期的引,GB/T 28630,3 缩赂语,下列,bp :,DIV1 :,DNA:,dNTPs:,EDTA,PCR:,SOS:,Taq 酶,Tris :,TE: T ris,4 试剂和材料,4. 1 除非另有说明,4. 2 二甲苯: 分析纯,4. 3 石蜡(熔点520C ~ 54,4. 4 中性树胶,4. 5 戴维森氏AFA(Oavidson's,4. 6 苏木精染色液见A. 2 0,4.7 1 %伊红储存液， 见A. 30,4.8 1 %焰红储存液见A.4 0,4. 9 伊红-焰红染色液:见A. 50,4 10 粘片剂: 见A.6 ,4 11 元水乙醇 分析纯,4 12 95% 乙醇 分析纯,4 13 85% 乙蹲. 见A. 70,4. 14 80% 乙醇: 见A. 8 ,SC/T 7237-2020,4. 15 75% 乙薛见A. 90,4. 16 50% 乙醇见A. 100,4. 17 组织病理学检测阳性对照为感染DIV1 且有明显病理变化的对虾头胸部组织切片,4 18 组织病理学检测阴性对照为未感染DIV1 的正常对虾头胸部组织切片,4. 19 TE 缓冲液见A.ll ,4.20 抽提缓冲液:见A. 12 0,4. 21 蛋白酶K 见A.13 0,4. 22 10 mol/ L 乙酸钱见A. 140,4.23 Tris 饱和盼(pH ~7 . 8) ，分析纯,4. 24 盼/氯仿/异戊蹲(25 ' 24 ' 1)分析纯,4.25 氯仿/异戊蹲(24 ' 1)分析纯,4. 26 dNTPs(各2. 5 mmol/U ，含dATP 、dTTP 、dGTP 、dCTP 各2.5 mmo l/ L 的混合物， 一20 0C保存,4.27 10XPCR 缓冲液，无Mg2+ ， 随T叫酶提供， 一20 0C 保存,4. 28 MgCl, (25 mmol/U ， 一20 0C 保存,4.29 Tα， q 酶(5 U/μU ， -20 0C 保存,4. 30 套式PCR 使用2 对引物，引物浓度为10μmo l/ L。其中，外侧引物F1 和R l，扩增457 bp 片段;内,侧引物F2 和R2 ，扩增129 bp 片段。引物序列如下,引物F1 ,5'-GGG-CGG-GAG-ATG-GTG-TTA-GAT-3';,引物R1 ,5'-TCG-TTT-CGG-TAC-GAA-GAT-GTA-3';,引物F2 ， 5 '-CGG-GAA-ACG-ATT-CGT-ATT-GGG- 3' ;,引物R2 ， 5'-TTG-CTT-GAT-CGG-CAT-CCT-TGA-3' 0,4.31 以十足目生物DNA 中的848 bp 片段为内参。引物浓度为10μmo l/ L ，序列如下.,引物F3 ， 5' -TGC-CTT-ATC-AGC-TNT-CGA- T寸G-TAG- 3' ;,引物R3 ， 5 仁TTC- AGN-TTT-GCA-ACC-ATA-CTT-CCC 扩,注N 表示G 、A 、T 或C,4.32 套式PCR 检测阳性对照为已知感染DIV1 且套式PCR 结果显示阳性的对虾组织样品， -800C,保存,4. 33 套式PCR 检测阴性对照为已知未感染DIV 1 的对虾组织样品， - 80 0C保存,434 套式PCR 检测空白对照为水,4.35 50X 电泳缓冲液:见A. 15 ,4.36 1 X 电泳缓冲液:见A.16 ,4. 37 琼脂糖:生化试剂,4.38 DNA 分子量标准:生化试l'fiL,4.39 6X 载样缓冲液 生化试剂,4. 40 电泳核酸染料.生化和J 剂,5 器材和设备,5. 1 切片机,5.2 组织脱水机,5 3 包埋机,54 染色机,5.5 展片机,2,SC/T 7237- 2020,5 6 平板烘片机,5. 7 光学显微镜,5. 8 恒温箱,5. 9 PCR 1义,5 10 电泳仪,5. 11 水平电泳梢,5. 12 紫外观察仪或凝胶成像仪,5. 13 高速冷冻离心机,5. 14 水浴锅或金属浴,5 15 普通冰箱,5. 16 - 80.C 超低温冰箱,5. 17 电炉或微波炉,5. 18 微量移液器,6 I恼床症状,濒死的虾失去游动能力，沉入池底。发病个体的肝膜腺萎缩、颜色变浅，空肠空胃。患病罗氏沼虾的,额剑基部组织呈典型的白色病变。部分患病凡纳滨对虾出现红体症状。随着病程的发展，表现出高死亡,率。参见附录B,7 采样,7. 1 采样对象,凡纳滨对虾( Li to……
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